सेल कल्चर सेल और आणविक जीव विज्ञान में उपयोग किए जाने वाले सबसे महत्वपूर्ण उपकरणों में से एक है, जो सामान्य शरीर क्रिया विज्ञान और जैव रसायन (जैसे, चयापचय अध्ययन, उम्र बढ़ने), कोशिकाओं पर दवाओं और विषाक्त यौगिकों के प्रभाव के साथ-साथ प्रभावों का अध्ययन करने के लिए एक उत्कृष्ट मॉडल प्रणाली प्रदान करता है। कोशिका उत्परिवर्तन और कार्सिनोजेनेसिस। इसका उपयोग ड्रग स्क्रीनिंग और विकास और जैविक यौगिकों (जैसे टीके, चिकित्सीय प्रोटीन) के बड़े पैमाने पर उत्पादन में भी किया जाता है। इन अनुप्रयोगों में से किसी के लिए सेल कल्चर का उपयोग करने का एक प्रमुख लाभ परिणामों की स्थिरता और पुनरुत्पादन है जो क्लोनल कोशिकाओं के एक बैच का उपयोग करके प्राप्त किया जा सकता है।
कोश पालन
सेल कल्चर से तात्पर्य जानवरों या पौधों से कोशिकाओं को हटाने और अनुकूल कृत्रिम वातावरण में उनकी वृद्धि से है। कोशिकाओं को सीधे ऊतक से हटाया जा सकता है और संस्कृति से पहले एंजाइमेटिक या यांत्रिक रूप से अलग किया जा सकता है, या उन्हें स्थापित सेल लाइनों या उपभेदों से प्राप्त किया जा सकता है
1. प्राथमिक प्रशिक्षण
प्राथमिक संस्कृति संस्कृति के चरण को संदर्भित करती है जब कोशिकाओं को ऊतक से अलग किया जाता है और उपयुक्त परिस्थितियों में प्रचारित किया जाता है जब तक कि वे सभी उपलब्ध सब्सट्रेट (यानी, संगम तक नहीं पहुंच जाते) पर कब्जा कर लेते हैं। इस स्तर पर, कोशिकाओं को निरंतर विकास के लिए अधिक जगह प्रदान करने के लिए नए विकास माध्यम के साथ एक नए कंटेनर में स्थानांतरित करके उपसंवर्धित (यानी, पारित) किया जाना चाहिए।
2. सेल लाइन्स
पहले उपसंस्कृति के बाद, प्राथमिक संस्कृतियों को सेल लाइन या सबक्लोन कहा जाता है। प्राथमिक संस्कृतियों से प्राप्त सेल लाइनों का एक परिमित जीवनकाल होता है (अर्थात, वे परिमित होते हैं) और जब वे पारित हो जाते हैं, तो उच्चतम विकास क्षमता वाली कोशिकाएं प्रबल होती हैं, जिसके परिणामस्वरूप जनसंख्या लिंग में जीनोटाइपिक और फेनोटाइपिक एकरूपता होती है।
3. सेल लाइन्स
एक सेल लाइन एक सेल स्ट्रेन बन जाती है यदि सेल लाइन की उप-जनसंख्या को क्लोनिंग या अन्य तरीकों से संस्कृति से सक्रिय रूप से चुना जाता है। माता-पिता की रेखा शुरू होने के बाद सेल लाइनें अक्सर अतिरिक्त आनुवंशिक परिवर्तन प्राप्त करती हैं।
4. सीमित सेल लाइन और निरंतर सेल लाइन
सामान्य कोशिकाएं आमतौर पर प्रसार की क्षमता खोने से पहले केवल सीमित संख्या में विभाजित होती हैं, एक आनुवंशिक रूप से निर्धारित घटना जिसे जीर्णता कहा जाता है; इन सेल लाइनों को परिमित कहा जाता है। हालांकि, कुछ सेल लाइनें परिवर्तन नामक प्रक्रिया के माध्यम से अमर हो जाती हैं, जो अनायास हो सकती हैं या रासायनिक या वायरल रूप से प्रेरित हो सकती हैं। एक परिमित कोशिका रेखा एक निरंतर कोशिका रेखा बन जाती है जब यह एक परिवर्तन से गुजरती है और अनिश्चित काल तक विभाजित करने की क्षमता प्राप्त कर लेती है।
लगातार सुसंस्कृत सेल लाइनें आनुवंशिक बहाव के लिए प्रवण होती हैं, परिमित सेल लाइनें उम्र के लिए अभिशप्त होती हैं, सभी सेल कल्चर माइक्रोबियल संदूषण के लिए अतिसंवेदनशील होते हैं, और यहां तक कि सबसे अच्छी तरह से चलने वाली प्रयोगशालाओं में उपकरण की विफलता हो सकती है। चूंकि स्थापित सेल लाइन एक मूल्यवान संसाधन हैं जिनका प्रतिस्थापन महंगा और समय लेने वाला है, इसलिए उन्हें दीर्घकालिक भंडारण के लिए क्रायोप्रिजर्व करना आवश्यक है।
एक बार उपसंस्कृति से शेष कोशिकाओं की एक छोटी संख्या प्राप्त हो जाने के बाद, उन्हें एक बीज स्टॉक के रूप में जमाया जाना चाहिए और सामान्य प्रयोगशाला उपयोग से संरक्षित किया जाना चाहिए। वर्किंग स्टॉक को जमे हुए बीज स्टॉक से तैयार किया जा सकता है और फिर से भर दिया जा सकता है। यदि बीज स्टॉक समाप्त हो गया है, तो क्रायोप्रिजर्व वर्किंग स्टॉक को ताजा बीज स्टॉक तैयार करने के लिए एक स्रोत के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है, प्रारंभिक फ्रीज से मात्रा में न्यूनतम वृद्धि प्रदान करता है।
डाइमिथाइल सल्फॉक्साइड (डीएमएसओ) या ग्लिसरॉल जैसे क्रायोप्रोटेक्टेंट्स की उपस्थिति में, सुसंस्कृत कोशिकाओं को क्रायोसंरक्षित करने का सबसे अच्छा तरीका तरल नाइट्रोजन में है। क्रायोप्रोटेक्टेंट्स माध्यम के हिमांक को कम करते हैं और शीतलन की दर को भी कम करते हैं, जिससे बर्फ के क्रिस्टल बनने का खतरा बहुत कम हो जाता है, जिससे कोशिकाओं को नुकसान हो सकता है और कोशिका मृत्यु हो सकती है।
DMSO कार्बनिक अणुओं के ऊतकों में प्रवेश की सुविधा के लिए जाना जाता है। डाइमिथाइल सल्फ़ोक्साइड युक्त अभिकर्मकों को संभालते समय, इस सामग्री के खतरों के लिए उपयुक्त उपकरण और प्रथाओं का उपयोग किया जाना चाहिए। स्थानीय नियमों के अनुसार अभिकर्मकों का निपटान करें।
जमे हुए कार्यशील सेल स्टॉक से कोशिकाएँ विकसित करें
मोबाइल बैंकिंग लॉगबुक भरना सुनिश्चित करें
मार्ग की संख्या निर्धारित करें, उदाहरण के लिए यदि पिछली कोशिकाएं जमी हुई थीं और उन्हें तीन बार पिघलाया गया था, तो विगलन प्रक्रिया चौथा मार्ग होगी।
सेल लाइन, मार्ग संख्या और दिनांक के साथ लेबल किए गए T75 फ्लास्क में ग्रोथ मीडिया (न्यूनतम मीडिया, बछड़ा सीरम और एंटीबायोटिक्स) जोड़ें
कम से कम 15 मिनट के लिए फ्लास्क को सीओ इनक्यूबेटर में 37 डिग्री और 5 प्रतिशत सीओ में क्षैतिज रूप से रखें। यह माध्यम को गर्म करेगा और इसे अपने सामान्य पीएच (7.0-7.6) पर लाएगा।
सेल लाइनों के साथ जमे हुए शीशियों को 37 डिग्री पानी के स्नान में कोमल आंदोलन के साथ पिघलाएं। संदूषण के जोखिम को कम करने के लिए, ओ-रिंग और कैप को पानी के स्तर (2-5 मिनट) से ऊपर रखें।
शीशी को जैविक सुरक्षा कैबिनेट (बीएसएल -2) में रखें। संदूषण से बचने के लिए शीशी खोलने से पहले 70 प्रतिशत इथेनॉल से पोंछ दें।
जमे हुए सेल फ्लास्क सामग्री को विकास माध्यम वाले T75 फ्लास्क में स्थानांतरित करें। फ्लास्क की सतह पर कोशिकाओं को समान रूप से वितरित करने के लिए फ्लास्क को धीरे से मिलाएं और हिलाएं।
5 प्रतिशत CO2 के साथ 37 डिग्री पर CO2 इनक्यूबेटर में रात भर फ्लास्क को इनक्यूबेट करें। कोशिकाओं को रात भर संलग्न करने दें
विकास का बदलता माध्यम
फ्लास्क को अतिरिक्त 2-4 दिनों के लिए 37 डिग्री, 5 प्रतिशत CO2 पर इनक्यूबेट करें और कोशिकाओं के बढ़ने तक निगरानी करें
एक बार जब कोशिकाएं लगभग 90 प्रतिशत संगम तक पहुंच जाती हैं, तो T150 फ्लास्क का उपयोग करके सेल स्टॉक का विस्तार किया जा सकता है
