स्तनधारी कोशिका संवर्धन प्रक्रम
स्तनधारी कोशिकाएं ऊतक निष्कर्षण, प्राथमिक संस्कृति और उपसंस्कृति की प्रक्रिया से गुजरती हैं। उपसंस्कृति को परिस्थितियों के अनुसार सेल लाइन संस्कृति और सेल लाइन संस्कृति में विभाजित किया जा सकता है। प्रत्येक प्रक्रिया को संक्षेप में निम्नानुसार वर्णित किया गया है:
प्राथमिक संस्कृति: ऊतक को जानवर से हटाने के बाद, इसे कीमा बनाया जाता है, विभिन्न एंजाइमों (आमतौर पर ट्रिप्सिन), चेलेटिंग एजेंटों (आमतौर पर ईडीटीए) और यांत्रिक तरीकों (बार-बार आकांक्षा और पिपेट उड़ाने) के साथ इलाज किया जाता है, और फिर व्यक्तिगत कोशिकाओं में बिखर जाता है, एक उपयुक्त माध्यम में खेती की जाती है जो कोशिकाओं को जीवित रहने, बढ़ने और गुणा करने में सक्षम बनाती है। प्राथमिक सेल संस्कृति आमतौर पर एक जानवर से कोशिकाओं को हटाने के बाद 10 मार्गों के भीतर सेल संस्कृति को संदर्भित करती है।
प्राथमिक सेल संस्कृति, सेल विभाजन और प्रजनन के बाद, संस्कृति धीरे-धीरे बढ़ती है, विकास संस्कृति स्थान को भरता है, और फिर एक-दूसरे के साथ संपर्क करता है, जिसके परिणामस्वरूप संपर्क निषेध होता है, और विकास दर धीरे-धीरे धीमी हो जाती है या यहां तक कि बंद हो जाती है। इसे उपसंस्कृति के लिए नई संस्कृति फ्लास्क में फिर से बीजित करने की आवश्यकता है।
Passaging (मार्ग): प्राथमिक कोशिकाओं को संस्कृति फ्लास्क से बाहर निकाला जाता है, सेल निलंबन तैयार किया जाता है, और आगे की संस्कृति के लिए दो या दो से अधिक संस्कृति फ्लास्क में विभाजित किया जाता है, जिसे उपसंस्कृति कहा जाता है।
सेल लाइन: एक सेल लाइन प्राथमिक संस्कृति में पहले मार्ग के बाद एक सेल लाइन है। यदि सेल लाइन का जीवित रहने का समय सीमित है, तो इसे परिमित सेल लाइन कहा जाता है। एक सेल लाइन जो असीमित प्रजनन क्षमता प्राप्त करती है और जीवित रहती है, उसे निरंतर सेल लाइन या अनंत सेल लाइन कहा जाता है।
सेल लाइन: जैविक रूप से पहचाने जाने वाले सेल लाइनों से, एकल सेल अलगाव, संस्कृति या स्क्रीनिंग द्वारा गठित सेल आबादी को सेल लाइन कहा जाता है। विभिन्न आकृतियों की सेल आबादी को तब अलग किया जाता है और प्राथमिक सेल लाइन से सुसंस्कृत किया जाता है ताकि सबक्लोन्स बन सकें।
स्तनधारी कोशिका संस्कृति की स्थिति
विभिन्न स्तनधारी कोशिकाओं को प्रत्येक चरण में बुनियादी संस्कृति स्थितियों की आवश्यकता होती है
1. बाँझ और गैर विषैले वातावरण: संस्कृति माध्यम और सभी संस्कृति उपकरणों के एसेप्टिक उपचार; संस्कृति प्रक्रिया के दौरान संदूषण को रोकने के लिए संस्कृति माध्यम में एंटीबायोटिकदवाओं को जोड़ना; सुसंस्कृत कोशिकाओं को नुकसान को रोकने के लिए मेटाबोलाइट्स को हटाने के लिए संस्कृति माध्यम का नियमित प्रतिस्थापन।
2. पोषण: तरल सिंथेटिक माध्यम शर्करा, अमीनो एसिड, विकास को बढ़ावा देने वाले कारकों, पानी, अकार्बनिक लवण, ट्रेस तत्वों, आदि शामिल हैं। आमतौर पर प्लाज्मा और सीरम जैसे प्राकृतिक घटकों को जोड़ना आवश्यक है
3. उपयुक्त तापमान और पीएच मान: मानव और स्तनधारी कोशिकाओं के लिए इष्टतम तापमान 36±0.5 डिग्री सेल्सियस है। उपयुक्त पीएच मान 7.2-7.4 है।
4. गैस पर्यावरण: गैस पर्यावरण आम तौर पर "95% हवा + 5% कार्बन डाइऑक्साइड" मिश्रित गैस है। ऑक्सीजन सेलुलर चयापचय के लिए आवश्यक एक गैस है, और कार्बन डाइऑक्साइड माध्यम के पीएच को बनाए रखता है।
