असामान्य सेल संस्कृतियों के सामान्य कारण - कैसे ... - समाचार

सेल कल्चर की प्रक्रिया में अक्सर किसी न किसी तरह की समस्या आती रहती है। सेल कल्चर को कम मत समझो, लेकिन इसमें विश्वविद्यालय के प्रश्न हैं। उपयोगकर्ताओं के साथ संवाद करने से आपको कई समस्याएं मिलेंगी जिनसे बचा जा सकता है। सेल कल्चर की प्रक्रिया में निम्नलिखित सामान्य हैं। असामान्यता के कारण का विश्लेषण करें।

पेट्री डिश

1. संवर्धित कोशिकाएँ दीवार से नहीं चिपकती हैं

संभावित कारण

1. अत्यधिक ट्रिप्सिन पाचन;

2. माइकोप्लाज्मा संदूषण;

3. माध्यम का पीएच मान बहुत अधिक क्षारीय (NaHCO3 अपघटन) है;

4. सेल एजिंग;

5. इनोक्युलेटेड कोशिकाओं की प्रारंभिक सांद्रता बहुत कम या बहुत अधिक है।

समाधान

1. ट्रिप्सिन पाचन समय को छोटा करें या ट्रिप्सिन एकाग्रता को कम करें;

2. संस्कृति को अलग करें और माइकोप्लाज्मा का पता लगाएं। स्टैंड या इनक्यूबेटर को साफ करें। यदि माइकोप्लाज्मा संदूषण पाया जाता है, तो संस्कृति को त्याग दें;

3. पीएच को समायोजित करने या बाँझ CO2 से भरने के लिए बाँझ एसिटिक एसिड समाधान का उपयोग करें;

4. नई संरक्षण कोशिकाओं को सक्षम करें;

इष्टतम टीका सेल एकाग्रता को समायोजित करें।

2. निलंबन कोशिकाओं का क्लस्टरिंग

संभावित कारण

1. संवर्धन माध्यम में कैल्शियम और मैग्नीशियम आयन होते हैं;

2. माइकोप्लाज्मा संदूषण;

3. प्रोटीज द्वारा अति-पाचन कोशिका लसीका का कारण बनता है;

4. डीएनए संदूषण।

समाधान

1. कोशिकाओं को कैल्शियम और मैग्नीशियम मुक्त संतुलित नमक के घोल से धोएं, और धीरे से फूंकें और चूसें

2. कक्ष एकल कक्ष निलंबन प्राप्त करते हैं;

3. संस्कृति को अलग करें और माइकोप्लाज्मा का पता लगाएं;

4. कोशिकाओं का डीएनएसेल उपचार।

3. संवर्धित कोशिकाएं धीरे-धीरे बढ़ती हैं

संभावित कारण

1. विभिन्न संस्कृति माध्यम या सीरम के प्रतिस्थापन के कारण;

2. कल्चर माध्यम में कोशिका वृद्धि के लिए आवश्यक कुछ घटक, जैसे कि ग्लूटामाइन या वृद्धि कारक, समाप्त हो गए हैं या कम हो गए हैं या नष्ट हो गए हैं;

3. संस्कृति में बैक्टीरिया या फंगल संदूषण की थोड़ी मात्रा होती है;

4. अभिकर्मकों का अनुचित भंडारण;

5. इनोक्युलेटेड कोशिकाओं की प्रारंभिक सांद्रता बहुत कम है;

6. कोशिकाएं वृद्ध होती हैं;

7. माइकोप्लाज्मा संदूषण।

समाधान

1. नए माध्यम और मूल माध्यम की संरचना की तुलना करें, सेल विकास प्रयोगों का समर्थन करने के लिए नए सीरम और पुराने सीरम की तुलना करें, और कोशिकाओं को धीरे-धीरे नए माध्यम के अनुकूल होने दें;

2. ताजा तैयार संस्कृति माध्यम में बदलें, या ग्लूटामाइन और विकास कारक जोड़ें;

3. संस्कृति के लिए एंटीबायोटिक मुक्त संस्कृति माध्यम का प्रयोग करें, यदि दूषित पाया जाता है, तो संस्कृति को त्यागें;

4. सीरम को -10 से -20 डिग्री पर स्टोर किया जाना चाहिए। संस्कृति माध्यम को अंधेरे में 2-8 डिग्री पर संग्रहित किया जाना चाहिए। सीरम युक्त पूर्ण संस्कृति माध्यम को 2-8 डिग्री पर संग्रहित किया जाना चाहिए और 1 सप्ताह के भीतर इसका उपयोग किया जाना चाहिए;

5. इनोक्युलेटेड कोशिकाओं की प्रारंभिक सांद्रता बढ़ाएँ;

6. एक नए संरक्षण सेल में बदलें;

7. संस्कृति को अलग करें और माइकोप्लाज्मा का पता लगाएं। स्टैंड और इनक्यूबेटर को साफ करें। यदि माइकोप्लाज्मा संदूषण पाया जाता है, तो संस्कृति को त्याग दें।

चौथा, सुसंस्कृत कोशिकाएं खराब बढ़ती हैं

संभावित कारण

A. कोशिका की ही स्थिति

1. कोशिका मार्ग की संख्या बड़ी है, और कोशिकाएँ उम्रदराज हैं;

2. सेल टीका राशि: बहुत कम टीका राशि, धीमी कोशिका वृद्धि;

3. कोशिकाओं के पारित होने में बहुत देर हो चुकी है: कोशिका विषाक्तता, जो पारित होने के बाद कोशिकाओं के विकास को प्रभावित करती है;

4. ट्रिप्सिन पाचन समय बहुत लंबा या बहुत कम है: यदि समय बहुत लंबा है, तो कोशिकाएं मर जाती हैं; यदि समय बहुत कम है, तो कोशिकाएँ पूरी तरह से गुच्छों में अलग नहीं होती हैं, और कोशिकाएँ मर जाती हैं;

5. क्रायोप्रिजर्वेशन एंड रिकवरी ऑफ सेल्स: स्लो फ्रीजिंग एंड इंस्टेंट लिसिस।

बी प्रदूषण

1. माइकोप्लाज्मा संदूषण;

2. मोल्ड संदूषण।

सी, संस्कृति माध्यम या सीरम

1. सीरम या मध्यम प्रतिस्थापन से पहले कोई सत्यापन नहीं;

2. क्या चयनित माध्यम उपयुक्त है;

3. क्या मध्यम तैयारी उपयुक्त है;

4. क्या माध्यम की तैयारी सही है।

D. पर्यावरण की खेती करना

1. क्या CO2 की आपूर्ति सामान्य है?

2. इनक्यूबेटर या शेकर का तापमान ठीक से नियंत्रित होता है।