सेल कल्चर प्लेट्स आमतौर पर सेल कल्चर प्रयोगों में उपयोग की जाती हैं और महत्वपूर्ण उपभोग्य हैं क्योंकि वे सेल प्रयोगों के लिए समय और अभिकर्मक सामग्री बचा सकते हैं, और अवलोकन और पहचान की सुविधा के लिए एक ही समय में कई गतिशील चर सेट कर सकते हैं।
संस्कृति प्लेट
1. 96, 24-वेल कल्चर प्लेट या पेट्री डिश के ढक्कन बहुत ढीले होते हैं, जो वेंटिलेशन के लिए सुविधाजनक होते हैं, लेकिन क्या बैक्टीरिया, मोल्ड और अन्य प्रदूषक भी अंदर आ जाएंगे?
उत्तर: (1) आवरण बहुत ढीला होता है और अर्ध-खुली संस्कृति से संबंधित होता है। इसका उद्देश्य सांस लेना है (वास्तव में, माध्यम के पीएच मान को बनाए रखने के लिए कल्चर डिश के बाहर CO2 को पूरी तरह से संस्कृति डिश के साथ आदान-प्रदान करने में सक्षम बनाना)।
(2) फायदे और नुकसान हैं, जिससे प्रदूषण की संभावना बढ़ जाती है। इसके अलावा, यह पेट्री डिश में तरल को वाष्पित करने का कारण बनता है, जो दवाओं की सटीक खुराक के लिए उल्लेखनीय है। अतः निम्नलिखित दो उपाय आवश्यक हैं:
ए) इनक्यूबेटर में हवा साफ होनी चाहिए (नियमित पराबैंगनी प्रकाश, अल्कोहल स्क्रबिंग, और इनक्यूबेटर को जितना संभव हो उतना कम चालू और बंद करना चाहिए)
बी) इनक्यूबेटर में हर समय 100 प्रतिशत आर्द्रता बनाए रखी जानी चाहिए (एक सिंक जिसमें इनक्यूबेटर में बाँझ आसुत जल रखा जाता है)। सड़न रोकनेवाला ऑपरेशन पर ध्यान दें!
2. मेरी कोशिकाओं को कल्चर प्लेट पर टीका लगाया जाता है, और कोशिकाएं हमेशा परिधीय भाग में एकत्रित होती हैं। इक्या करु मैं देखता हूं कि बीच में कुछ साथियों की कोठरियां इकट्ठी हैं। क्या प्लेट की गुणवत्ता में कोई समस्या है?
ए: आप अपनी कोशिकाओं को कैसे मिलाते हैं? क्या यह पिपेट फूंक रहा है या कल्चर प्लेट को हिला रहा है? यदि यह बाद वाला है, और इसे एक सर्कल में हिलाया जाता है, तो यह बहुत संभावना है कि कोशिकाओं को केन्द्रापसारक बल के कारण आसपास के हिस्से में फेंक दिया जाएगा, जिसके परिणामस्वरूप कोशिकाओं के बीच में होगा। कम, चार सप्ताह से अधिक! आप इसे स्वयं आजमा सकते हैं!
एक अच्छा तरीका: सीड प्लेट की खेती करने से पहले, कल्चर प्लेट को कुछ घंटों के लिए इनक्यूबेटर में रखें और फिर इसे बाहर निकाल लें। कोशिकाओं को बोते समय बल हल्का होना चाहिए। आप कल्चर प्लेट होल के किनारे पर एक ड्रॉपर का उपयोग धीरे-धीरे जोड़ सकते हैं ताकि सेल सस्पेंशन को प्लेट के कुओं में प्रवाहित किया जा सके, और सुसंस्कृत कोशिकाएं समान रूप से बढ़ती हैं। याद रखें कि ऑसिलेटर को कभी न हिलाएं नहीं तो आपकी कोशिकाएं आपस में चिपक जाएंगी जैसा आपने कहा था।
3. मेरी कोशिकाएं सामान्य रूप से पारित होती हैं, लेकिन जब एक प्रकार सिक्स-वेल प्लेट (दवा जोड़ने और नियंत्रण की परवाह किए बिना) में जाता है, तो हमेशा दो या तीन वेल (यादृच्छिक) कोशिकाएं होती हैं जो अच्छी तरह से विकसित नहीं होती हैं, छोटी होती हैं, और प्रतीत होती हैं टूट जाने के लिए। क्या किसी ने इसका सामना किया है? कारण क्या है?
ए: यह आपके द्वारा जोड़े जाने वाले तरल के तापमान से संबंधित हो सकता है। यदि आपकी कोशिकाओं को माध्यम को बदलने और माध्यम को जोड़ने के लिए अभी-अभी निकाला गया है, और माध्यम को भी जल्द ही 4 डिग्री रेफ्रिजरेटर से बाहर निकाल लिया जाता है, तो कोशिकाओं के लिए मृत्यु तक जमना आसान होता है। यह अनुशंसा की जाती है कि आप पहले 15 मिनट के लिए इनक्यूबेटर में माध्यम को सर्वोत्तम रूप से इनक्यूबेट करें।
इसके अलावा, यह आपकी कोशिकाओं के विकास की स्थिति से भी संबंधित है। खुराक से पहले कोशिकाओं को उच्च सीरम सांद्रता के साथ ऊष्मायन किया जा सकता है। सुनिश्चित करें कि कोशिकाएं अच्छी स्थिति में हैं।
या इसे एक 37-डिग्री पानी के स्नान में उगाया जा सकता है, या कल्चर प्लेट की ही समस्या हो सकती है, आप दूसरी कल्चर प्लेट आज़मा सकते हैं। एक अन्य संभावना सेल राज्य समस्या है, थाली बोने जब सीरम एकाग्रता को समायोजित करें।
4. हाल के दिनों में, मैंने कोशिकाओं को टीका लगाने के लिए छह-वेल कल्चर प्लेट का उपयोग किया। 24 घंटे तक कल्चर करने के बाद मैंने मीडियम बदल दिया। माध्यम बदलने से पहले, मैंने देखा कि कोशिकाएँ दीवार से चिपकी हुई थीं, और स्थिति बहुत अच्छी थी। मीडियम बदलने के बाद मैंने तुरंत माइक्रोस्कोप का इस्तेमाल किया। यह देखा गया कि प्रत्येक कुएं में लगभग आधी कोशिकाओं ने मृत्यु के निकट की अवस्था दिखाई। कोशिकाएँ बहुत छोटी हो जाती हैं और बहुत सारा मलबा पैदा करती हैं, जबकि अन्य आधी कोशिकाएँ सामान्य होती हैं, असामान्य कोशिकाओं और सामान्य कोशिकाओं के बीच एक वाटरशेड होता है, ऊपरी आधा वृत्त अच्छा होता है, निचला आधा वृत्त अच्छा नहीं होता है, कैसा है यह? क्या बात क्या बात?
ए: आप देख सकते हैं कि निम्न में से कोई कारण है या नहीं
एक। संस्कृति प्लेट को क्षैतिज रूप से नहीं रखा गया है;
बी। आपके कल्चर माध्यम के बारे में क्या ख्याल है, अगर कल्चर माध्यम समाप्त हो जाता है, तो कोशिकाएं पालन नहीं करेंगी। ताजा तैयार माध्यम का प्रयास करें
सी। प्लेट की समस्या हो सकती है। दूसरे ब्रांड की प्लेट बदलने या कल्चर बोतल का उपयोग करने में कोई समस्या नहीं है।
डी। क्या आपने माध्यम बदलते समय पंखे के प्रभाव पर ध्यान दिया, खासकर जब कई संस्कृति प्लेटों को बदलने की आवश्यकता होती है, तो हवा और पानी के नुकसान के कारण कोशिकाओं को सिकुड़ना और टूटना आसान होता है। यदि ऐसा है, तो माध्यम को एक-एक करके बदलना चाहिए, और पिपेट को बर्बाद करने से डरो मत, ऑपरेशन की दक्षता पर ध्यान दें!
5. कोशिकाओं को पचाए और एक 24-वेल प्लेट में टीका लगाए हुए चार दिन हो गए हैं, और प्रत्येक कुएं का मध्य भाग हमेशा भरा हुआ था। माध्यम को हर दिन पीबीएस से धोया जाता था, और यही स्थिति तब होती थी जब माध्यम को अगले दिन बदल दिया जाता था। किनारे काफी लंबे हैं और केंद्र मृत कोशिकाओं से भरा है?
उत्तर: यदि कोशिकाएँ चारों ओर सघन और बीच में विरल हों, तो इसके लगभग निम्नलिखित कारण होते हैं:
माध्यम को बहुत कम जोड़ा गया था। मुख्य रूप से तरल तनाव की समस्या के कारण।
क्या इनक्यूबेटर के तल में पानी कम है;
सेल सीडिंग के बाद हिलना बहुत ज्यादा था। केन्द्रापसारक बल के कारण कोशिकाएँ चारों ओर वितरित होती हैं।
कोशिकाओं को समान रूप से वितरित करने की कुंजी यह है कि प्रत्येक प्रकार के सेल में अलग-अलग अंतर होते हैं, और अन्य लोगों के सेल संचालन आपके लिए उपयुक्त नहीं हो सकते हैं। इसलिए आपको अपने दम पर एक्सप्लोर करना होगा और नियमों का एक सेट खोजना होगा जो आपकी अपनी कोशिकाओं के लिए अद्वितीय हैं। आपके पास निम्न अनुभव है:
(1) बोए जाने वाले सभी सेल निलंबनों को बोने से पहले एक पिपेट के साथ मिश्रित किया जाना चाहिए।
(2) अभिलेखों के अनुसार, 24-वेल प्लेट की तरल मात्रा 1 मिली है, वास्तव में, 1 मिली की मात्रा पर्याप्त है।
(3) टीका लगाते समय, धीरे-धीरे नमूना जोड़ें, और पिपेट टिप को थोड़ा घुमाना याद रखें। कोशिकाओं को एक नमूना जोड़ बिंदु पर जमा होने से बचाने के लिए नमूना को बहुत तेजी से नहीं जोड़ा जा सकता है, और विभिन्न भागों में नमूने जोड़ने पर ध्यान देना चाहिए, जो चल बंदूक को जोड़ते समय होता है। सिर, कृत्रिम रूप से कोशिकाओं को समान रूप से वितरित करते हैं। ऐसा करने से कोशिकाओं को समान रूप से वितरित करने का प्रभाव पड़ता है।