पीसीआर ट्यूब खरीदार की मार्गदर्शिका

पीसीआर तकनीक डीएनए की प्राकृतिक प्रतिकृति प्रक्रिया के समान है, और इसकी विशिष्टता लक्ष्य अनुक्रम के दोनों सिरों के पूरक ओलिगोन्यूक्लियोटाइड प्राइमरों पर निर्भर करती है। पीसीआर में तीन बुनियादी प्रतिक्रिया चरण होते हैं: विकृतीकरण, एनीलिंग और विस्तार। यह प्रतिक्रिया प्रक्रिया पीसीआर प्रतिक्रिया कंटेनर में की जाती है। जीन प्रवर्धन उपकरण के निरंतर विकास के साथ, प्रतिक्रिया कंटेनर ने पीसीआर के लिए समर्पित पतली दीवारों वाले 0.2 मिलीलीटर तक 1.5 मिलीलीटर से 0.2 मिलीलीटर (0.25 मिलीलीटर) तक सेंट्रीफ्यूज ट्यूब के क्रमिक विकास का भी अनुभव किया है। , 0.1mlpcr ट्यूब. पीसीआर प्रवर्धन प्रतिक्रियाओं की संख्या में वृद्धि के साथ, पीसीआर स्ट्रिप्स और पीसीआर प्लेटों के लिए उच्च-थ्रूपुट जीन प्रवर्धन कंटेनर धीरे-धीरे बनते हैं।

पीसीआर में तीन बुनियादी प्रतिक्रिया चरण होते हैं: विकृतीकरण-एनीलिंग-एक्सटेंशन

टेम्पलेट डीएनए का विकृतीकरण:

टेम्पलेट डीएनए को एक निश्चित अवधि के लिए लगभग 94 डिग्री सेल्सियस तक गर्म करने के बाद, टेम्पलेट डीएनए के डबल-फंसे डीएनए या पीसीआर प्रवर्धन द्वारा गठित डबल-फंसे डीएनए को अलग कर दिया जाता है, ताकि इसे अगले दौर की प्रतिक्रिया के लिए तैयार करने के लिए प्राइमर के साथ जोड़ा जा सके।

प्राइमरों के साथ टेम्पलेट डीएनए के एनीलिंग (renaturation):

टेम्पलेट डीएनए को हीटिंग द्वारा एक एकल स्ट्रैंड में विकृत करने के बाद, और तापमान लगभग 55 डिग्री सेल्सियस तक कम हो जाता है, प्राइमरों को टेम्पलेट डीएनए के एकल स्ट्रैंड के पूरक अनुक्रम के साथ जोड़ा जाता है।

प्राइमरों का विस्तार:

Taq की कार्रवाई के तहत, डीएनए टेम्पलेट-प्राइमर संयुग्मन dNTP का उपयोग प्रतिक्रिया कच्चे माल के रूप में करता है ताकि आधार युग्मन और अर्ध-आरक्षित प्रतिकृति के सिद्धांत के अनुसार टेम्पलेट डीएनए श्रृंखला के पूरक को संश्लेषित किया जा सके।

PCR प्रौद्योगिकी के मूल सिद्धांत

प्रौद्योगिकी टेम्पलेट डीएनए, प्राइमरों और चार डीऑक्सीराइबोन्यूक्लियोटाइड्स की उपस्थिति में डीएनए पोलीमरेज़ की एक एंजाइमेटिक संश्लेषण प्रतिक्रिया पर निर्भर करती है।

डीएनए पोलीमरेज़ डबल-फंसे डीएनए के एक छोटे से टुकड़े के साथ संश्लेषण शुरू करने के लिए एक टेम्पलेट के रूप में एकल-फंसे डीएनए का उपयोग करता है। एक या दो सिंथेटिक ऑलिगोन्यूक्लियोटाइड प्राइमरों को आंशिक डबल-फंसे डीएनए बनाने के लिए एकल-फंसे डीएनए टेम्पलेट में एक पूरक अनुक्रम के साथ जोड़ा जाता है।

एक उपयुक्त तापमान और पर्यावरण के तहत, डीएनए पोलीमरेज़ प्राइमर के 3'-OH अंत में डीऑक्सीमोनोन्यूक्लियोटाइड जोड़ता है, और एक नए डीएनए पूरक स्ट्रैंड को संश्लेषित करने के लिए टेम्पलेट की 5'→3' दिशा के साथ विस्तार करने के लिए प्रारंभिक बिंदु के रूप में इसका उपयोग करता है।

PCR ट्यूबों और सेंट्रीफ्यूज ट्यूबों के बीच का अंतर

पीसीआर ट्यूब:

पीसीआर प्रतिक्रिया प्लेट 96-अच्छी तरह से या 384-अच्छी तरह से है, जिसे विशेष रूप से बैच प्रतिक्रियाओं के लिए डिज़ाइन किया गया है। सिद्धांत यह है कि पीसीआर मशीन और सीक्वेंसर का थ्रूपुट आमतौर पर 96 या 384 होता है।

सेंट्रीफ्यूज ट्यूब:

सेंट्रीफ्यूज ट्यूब जरूरी नहीं कि एक पीसीआर ट्यूब हो। उनकी क्षमता के अनुसार कई प्रकार के सेंट्रीफ्यूज ट्यूब होते हैं। आमतौर पर उपयोग किए जाने वाले 1.5 मिलीलीटर, 2 मिलीलीटर, 5 मिलीलीटर, 15 या 50 मिलीलीटर हैं, और सबसे छोटे एक (250ul) को पीसीआर ट्यूब के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है।

PCR ट्यूब कैसे चुनें

हमने तापमान के लिए सबसे सटीक स्थान चुनने की उम्मीद में पीसीआर ट्यूबों को रखने का फैसला किया।

तापमान की सबसे सटीक स्थिति मॉड्यूल के तहत तापमान सेंसर के ऊपर की स्थिति होनी चाहिए (सेंसर के गलत तापमान की परवाह किए बिना)।

विभिन्न पीसीआर उपकरणों के तापमान सेंसर की स्थिति अलग-अलग है।

उदाहरण के लिए, AB के 2720 में बीच में केवल एक है, MJ के 200 में तीन सेंसर हैं, जो निचले बाएं, मध्य और ऊपरी दाएं हैं, एपेनडोर्फ की पंक्ति A या H में होनी चाहिए, और Dongshenglong 811 में तीन तापमान सेंसर हैं, B1-2 का चयन किया जाना चाहिए, C1-2, C6-7, D6-7, B11-12, C11-12, क्योंकि ये बिंदु समय के पाबंद बिंदु हैं।