जैसा कि कहा जाता है, यदि कोई कार्यकर्ता अच्छा काम करना चाहता है, तो उसे पहले अपने औजारों को तेज करना होगा। संतोषजनक पीसीआर प्रयोग परिणाम प्राप्त करने के लिए उपभोग्य सामग्रियों का चुनाव बहुत महत्वपूर्ण है। पीसीआर परिणामों का विश्लेषण करते समय, हम अक्सर प्राइमरों, एंजाइम एकाग्रता, तापमान और समय के विश्लेषण पर ध्यान केंद्रित करते हैं, लेकिन इस बात को अनदेखा करते हैं कि पीसीआर उपभोग्य वस्तुएं भी प्रभावित करने वाले कारकों में से एक हैं। पीसीआर उपभोग्य सामग्रियों के कई प्रकार हैं, सही पीसीआर उपभोग्य सामग्रियों का चयन कैसे करें? यहां कुछ प्रश्न दिए गए हैं जो आपको अपना उत्तर खोजने में मदद करेंगे।
पीसीआर उपभोज्य
1. पीसीआर उपभोग्य सामान आम तौर पर पीपी से क्यों बने होते हैं?
चाहे वह साधारण पीसीआर हो या रीयल-टाइम फ्लोरेसेंस क्वांटिटेटिव पीसीआर (क्यूपीसीआर), आमतौर पर इसकी उपभोग्य वस्तुएं अभिकर्मकों या नमूनों के सीधे संपर्क में होंगी, इसलिए उत्पादन और तैयारी प्रक्रिया में उच्च गुणवत्ता वाली सामग्री और अच्छी प्रसंस्करण तकनीकों की आवश्यकता होती है। सामान्य उपभोग्य वस्तुएं पॉलीप्रोपाइलीन (पीपी) से बनी होती हैं। पॉलीप्रोपाइलीन (पीपी) एक जैविक रूप से निष्क्रिय सामग्री है, सतह जैव अणुओं का पालन करना आसान नहीं है, और इसमें अच्छा रासायनिक प्रतिरोध और तापमान सहनशीलता है।
2. अलग-अलग वॉल्यूम के साथ पीसीआर ट्यूब/प्लेट कैसे चुनें?
पीसीआर ट्यूबों/प्लेटों के लिए सामान्य मात्रा:
• एकल ट्यूब/{{0}}ट्यूब/12-ट्यूब: 0.5mL, 0.2mL, 0.1mL
• {{0}}वेल प्लेट: 0.2mL, 0.1mL
• {{0}}वेल प्लेट: 0.02mL
पीसीआर ट्यूबों/प्लेटों के लिए विनिर्देश:
विशिष्ट प्रयोगात्मक आवश्यकताओं के अनुसार उपयुक्त उत्पाद का चयन करें। अधिकांश पीसीआर ट्यूबों की मात्रा पीसीआर प्रतिक्रियाओं की आवश्यकताओं को पूरा कर सकती है। क्षमता विनिर्देश मानक क्षमता और कम क्षमता में उपलब्ध हैं। आम तौर पर, पहले कम क्षमता वाले ट्यूबों को चुनने की सिफारिश की जाती है। क्योंकि कम मात्रा वाले रिएक्टर ट्यूब/प्लेटों में हेडरूम कम होता है, गर्मी हस्तांतरण में सुधार होता है और वाष्पीकरण कम हो जाता है। साथ ही, नमूने जोड़ते समय बहुत अधिक या बहुत कम नमूना जोड़ने से बचना आवश्यक है। बहुत अधिक कम तापीय चालकता, रिसाव और क्रॉस-संदूषण का कारण बन सकता है, जबकि बहुत कम नमूना वाष्पीकरण हानि का कारण बन सकता है।
3. एकल ट्यूब या 8-पंक्ति ट्यूब के फ्लैट कवर/उत्तल कवर के बीच क्या अंतर है?
जब नमूना मात्रा छोटा होता है, एकल ट्यूब या {{0}}ट्यूब ट्यूब को प्राथमिकता दी जाती है। हालाँकि, जब प्रतिक्रिया मात्रा की आवश्यकता बड़ी होती है, तो एकल ट्यूब प्रबल होती हैं, और मात्रा 0.5 एमएल तक पहुँच सकती है। फ्लैट कवर और उत्तल कवर के साथ सिंगल ट्यूब और 8-ट्यूब ट्यूब दो प्रकार के होते हैं, प्रत्येक के अपने फायदे हैं। फ्लैट कैप qPCR के लिए सटीक फ्लोरोसेंट सिग्नल डिलीवरी प्रदान करता है; मार्करों पर लिखना आसान है। दबाव के कारण ट्यूब विरूपण को कम करने के लिए उत्तल कवर पीसीआर उपकरण कवर के संपर्क में है; हालाँकि, यह फ्लोरोसेंट संकेतों के संचरण को प्रभावित करेगा और इसे qPCR प्रयोगों पर लागू नहीं किया जा सकता है।
4. विभिन्न 96-वेल प्लेट्स के उपयोग परिदृश्यों में क्या अंतर हैं?
96-वेल प्लेट्स को आम तौर पर नॉन-स्कर्टेड प्लेट्स, सेमी-स्कर्टेड प्लेट्स और फुल-स्कर्टेड प्लेट्स में बांटा जाता है।
स्कर्ट रहित प्लेटें: अधिकांश थर्मल साइक्लर्स या qPCR मशीनों के साथ संगत, लेकिन स्वचालित अनुप्रयोगों के लिए उपयुक्त नहीं है। पिपेटिंग प्रक्रिया के दौरान स्थिरता अधिक नहीं होती है, और इसे प्लेट धारक के साथ उपयोग करने की आवश्यकता होती है।
अर्ध-स्कर्ट प्लेट: इसे लेबल करने या बारकोड लागू करने और स्वचालित अनुप्रयोग के लिए अनुकूलित किया जा सकता है, और इसमें अच्छी पाइपिंग स्थिरता है।
पूर्ण स्कर्ट प्लेट: स्वचालित प्रयोगशाला अनुप्रयोगों के लिए बहुत उपयुक्त है, लेकिन लेबल और बारकोड अनुप्रयोगों के लिए भी उपयुक्त है। अच्छी यांत्रिक शक्ति, बाहर निकलने वाले मॉड्यूल के साथ पीसीआर मशीनों के लिए उपयुक्त, और पाइपिंग के दौरान उच्च स्थिरता।
5. क्या पीसीआर प्लेट/ट्यूब सामग्री अधिक मोटी और अधिक स्थिर है?
नहीं। लगातार गर्मी हस्तांतरण प्रदान करने के लिए पीसीआर उपभोग्य सामग्रियों में एक समान दीवार की मोटाई होनी चाहिए। अति पतली ट्यूब दीवार मानक संस्करण की तुलना में 50 प्रतिशत पतली है, जो थर्मल बाधा को और कम कर सकती है, जिसके परिणामस्वरूप तेज और बेहतर प्रतिक्रिया होती है।
6. 96-कुएँ या 384-कुएँ की प्लेटों के लिए, कटे हुए कोने और लेबल समान क्यों नहीं हैं?
कॉर्नर कटिंग: पीसीआर प्लेट के कॉर्नर कटिंग पोजीशन का चुनाव आसान पोजिशनिंग के लिए अनुकूलित उपकरण की आवश्यकताओं पर निर्भर करता है।
पहचान: पीसीआर प्लेटों पर अल्फ़ान्यूमेरिक चिह्न व्यक्तिगत कुओं और नमूना स्थानों की पहचान करने में मदद करते हैं। आम तौर पर, यह एक उभरा हुआ रंग संख्या लोगो या उत्कीर्ण लोगो होता है। कुछ स्वचालित अनुप्रयोग प्रयोगों के लिए, अंकित निशान वाली प्रतिक्रिया प्लेट को बेहतर तरीके से सील किया जाएगा।
7. कुछ पीसीआर प्लेट वेल उभरे हुए हैं, जबकि अन्य फ्लैट हैं। इनमें से कोनसा बेहतर है?
जो उपयुक्त है वह अच्छा है। सामान्य पीसीआर प्लेटों के दो प्रकार होते हैं: फ्लैट वेल एज और रेज्ड वेल एज। अधिकांश थर्मल साइक्लर्स के लिए उपयुक्त फ्लैट वेल एज के साथ रिएक्शन प्लेट। रिसर छेद के किनारे पर प्रतिक्रिया प्लेट सीलिंग के लिए सुविधाजनक है, जो नमूनों के बीच क्रॉस-संदूषण के जोखिम को कम कर सकती है।
8. विभिन्न रंगों की पीसीआर ट्यूब/प्लेट कैसे चुनें?
साधारण पीसीआर प्रतिक्रियाओं के लिए, पारदर्शी का उपयोग किया जा सकता है। वास्तविक समय पीसीआर प्रतिक्रिया में, सफेद ट्यूब की संवेदनशीलता और स्थिरता अपेक्षाकृत अधिक होती है। सफेद ट्यूब की दीवारें प्रतिदीप्ति को ट्यूब की दीवारों और अपवर्तन से गुजरने से रोकती हैं, जिससे प्रतिदीप्ति को हीटिंग मॉड्यूल से गुजरने से रोका जा सकता है, मॉड्यूल द्वारा अवशोषित किया जा सकता है, या असंगत रूप से प्रतिबिंबित किया जा सकता है। पारदर्शी ट्यूबों की तुलना में, सफेद ट्यूबों के शीर्ष पर मजबूत और अधिक केंद्रित प्रतिदीप्ति संकेत एकत्र किए जा सकते हैं।