हमारे ऑपरेशन के तरीके, विवरण और सैद्धांतिक स्पष्टीकरण आपके ऑपरेशन के लिए दिशानिर्देश बन जाएंगे, जैसे पोषक तत्वों के समाधान और सेल फ्लास्क की नियुक्ति; नसबंदी प्रक्रियाएं; उनके सही संचालन को जानने के लिए, पहली बार उन पर ध्यान देना आवश्यक है।
कोशिकाओं का पोषण करना जैसे बच्चों को पालना
कोशिकाएं वास्तव में नाजुक होती हैं। इनक्यूबेटर में पानी की कमी, कार्बन डाइऑक्साइड, बिजली की विफलता और अपर्याप्त तापमान जैसी असामान्य घटनाओं को रोकने के लिए हर दिन इसकी जांच करना सबसे अच्छा है। बार-बार के प्रयोगों से होने वाले अधिक दर्द से बचने के लिए समय रहते इन दुर्घटनाओं को हल करना भी आवश्यक है। .
अच्छी कोशिकाओं को समय रहते बोया जाना चाहिए
कोशिकाओं को बैचों में पारित किया जाता है ताकि अगर एक बैच विफल हो जाए, तो भी एक अतिरिक्त हो। बाद वाले जैसे औसत व्यक्ति के लिए यह आसान नहीं हो सकता है। लेकिन यह मेरे खून का सबक है। एक बार कोशिकाओं के दूषित हो जाने के बाद, पूरी सेना का सफाया हो गया। उस समय मुझे खेद है कि मैंने बीज की रक्षा नहीं की।
प्रत्येक कोशिका की अपनी विशेषताएं होती हैं और उनके साथ अलग तरह से व्यवहार किया जाना चाहिए।
कोशिकाएं इंसानों के समान होती हैं, और विभिन्न कोशिकाओं में अलग-अलग संस्कृति की विशेषताएं होती हैं। खेती की प्रक्रिया में सावधान रहें। विभिन्न सेल लाइनें विभिन्न मीडिया और सीरम का उपयोग करती हैं।
उदाहरण के लिए, मेरे द्वारा बनाई गई चिकनी पेशी कोशिकाएं बहुत सक्रिय हैं और जीवंत रहना पसंद करती हैं। 2-3 दिनों में, एक बड़ी आबादी हो जाएगी, और मुझे खाना-पीना बहुत पसंद नहीं है। यह पालने के लिए वास्तव में सबसे अच्छा बच्चा है। एंडोथेलियल कोशिकाओं और चिकनी मांसपेशियों की कोशिकाओं में समान व्यक्तित्व होते हैं, लेकिन वे बहुत अनहेल्दी और मैला होते हैं। उनमें कई स्रावी कोशिकाएं होती हैं, इसलिए उन्हें बार-बार बदलने और धोने की जरूरत होती है। RAW264.7 कोशिकाएं भी बहुत खुशमिजाज और खाने योग्य हैं। उन्हें बार-बार खिलाना जरूरी है। सिरदर्द यह है कि कोशिकाएं आसानी से सक्रिय हो जाती हैं। यह अच्छा है कि जिस बोतल और वातावरण में वे सुसंस्कृत हैं, वे एंडोटॉक्सिन से मुक्त हैं, लेकिन एक मां के रूप में उन्हें संतुष्ट करना मेरे लिए मुश्किल है।
प्रशिक्षण से पहले काम की तैयारी
उपभोग्य सामग्रियों को संभालना, अभिकर्मकों का विन्यास, बाँझपन परीक्षण आदि शामिल हैं।
कांच के बर्तनों की सफाई। कांच के बने पदार्थ (सेल बोतल, पोषक घोल वाली बोतल, छोटी पेनिसिलिन बोतल, आदि) के लिए, पहले वाशिंग पाउडर को साफ करने के लिए उपयोग करें (मृत कोनों पर ध्यान दें), और फिर कुल्ला करें। 24 घंटे से अधिक के लिए एसिड के घोल में भिगोएँ, फिर अवशिष्ट एसिड के घोल को हटाने के लिए 10 बार साफ पानी से कुल्ला करें। बोतल आदि धोने के दौरान जोर से हिलाते हैं। फिर 24 घंटे के लिए डबल डिस्टिल्ड वॉटर में भिगो दें। सूखने के बाद इसे लपेट कर 160 डिग्री पर 2 घंटे के लिए सुखा लें।
अभिकर्मक विन्यास। सेल कल्चर के लिए एक तरल के रूप में, आम तौर पर, डबल-डिस्टिल्ड पानी से अधिक का उपयोग किया जा सकता है। और पीएच मान के समायोजन पर ध्यान दें।
बाँझपन परीक्षण। मुख्य रूप से फिल्टर नसबंदी का उपयोग करें: जैसे कि ट्रिप्सिन, एंटीबायोटिक्स, जी -418 समाधान, विभिन्न मीडिया, सोडियम पाइरूवेट, ग्लूटामाइन, आदि। कुछ को ऑटोक्लेव किया जा सकता है: पीबीएस, डी-हैंक, आदि।
अभिकर्मकों को एलिकोट्स में संग्रहित किया जाता है
जिसमें पोषक तत्व घोल, पैनक्रिएटिन, सीरम आदि शामिल हैं।
सीरम विशेष रूप से महत्वपूर्ण है। सीरम को -20 डिग्री पर संग्रहित किया जाना चाहिए। यदि एक समय में एक बोतल का उपयोग नहीं किया जा सकता है, 40-50मिलीलीटर को बाँझ एसिड-उपचारित बोतलों में छोड़ा जा सकता है, या पेनिसिलिन की बोतलों में भी संग्रहीत किया जा सकता है। आम तौर पर, निर्माता द्वारा प्रदान किया गया सीरम बाँझ होता है और उसे बाँझ निस्पंदन की आवश्यकता नहीं होती है। यदि सीरम में बहुत अधिक निलंबित पदार्थ पाए जाते हैं, तो सीरम को माध्यम में जोड़ा जा सकता है और एक साथ फ़िल्टर किया जा सकता है, और सीरम को सीधे फ़िल्टर नहीं किया जाना चाहिए। (सामान्य परिस्थितियों में सेल संस्कृति पर कोई प्रभाव नहीं)
बोतलबंद सीरम को धीरे-धीरे पिघलाया जाना चाहिए: 4 डिग्री रेफ्रिजरेटर पूरी तरह से भंग हो जाता है और फिर पैकेजिंग में बांटा जाता है। विघटन प्रक्रिया के दौरान, तापमान और संरचना को समान बनाने और वर्षा की घटना को कम करने के लिए इसे नियमित रूप से हिलाया जाना चाहिए (सावधान रहें कि हवा के बुलबुले न बनें)। -20 डिग्री से 37 डिग्री तक सीधे पिघलना न करें, क्योंकि तापमान में बहुत अधिक परिवर्तन होता है, जो आसानी से प्रोटीन जमावट और वर्षा का कारण बन सकता है।
हीट इनएक्टिवेशन से तात्पर्य पूरी तरह से पिघले हुए सीरम को 56 डिग्री पर 30 मिनट तक गर्म करने से है। पानी के स्नान के 56 डिग्री तक बढ़ने के बाद, सीरम डालें, तापमान के 56 डिग्री तक बढ़ने की प्रतीक्षा करें और समय गिनें, आम तौर पर इसे हर 5 मिनट में एक बार समान रूप से हिलाएं। इस ताप उपचार का उद्देश्य सीरम में पूरक घटकों को निष्क्रिय करना है। जब तक आवश्यक न हो, यह गर्मी उपचार आम तौर पर नहीं किया जाता है क्योंकि यह तलछट में महत्वपूर्ण वृद्धि का कारण बनता है और सीरम की गुणवत्ता को प्रभावित करता है। कोशिकाओं पर सीरम (विभिन्न बैचों सहित) को बदलने के प्रभाव पर ध्यान दें।
बाँझपन की प्रबल भावना
प्रयोग से पहले, अल्ट्रा-क्लीन बेंच को 30 मिनट के लिए यूवी प्रकाश विकिरण द्वारा निष्फल किया गया था, सड़न रोकने वाली ऑपरेशन सतह को 70 प्रतिशत इथेनॉल के साथ मिटा दिया गया था, और अल्ट्रा-क्लीन बेंच फैन को प्रायोगिक ऑपरेशन शुरू होने से कुछ मिनट पहले चालू कर दिया गया था। .
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