पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन (पीसीआर) जीवन विज्ञान प्रयोगशालाओं में सबसे प्रसिद्ध तरीकों में से एक है।
एकत्रित नमूनों या परिणामों के उत्कृष्ट प्रबंधन और विश्लेषण के लिए पीसीआर प्लेट प्रथम श्रेणी के प्लास्टिक से बने होते हैं।
उनके पास पतली, समान दीवारें हैं जो सटीक गर्मी हस्तांतरण प्रदान करती हैं।
वास्तविक समय के आवेदन की तैयारी में, डीएनए या आरएनए के छोटे अंशों को अलग किया जाता है और पीसीआर प्लेटों में संग्रहित किया जाता है।
पीसीआर प्लेटें हीट सीलिंग में बहुत कुशल हैं और गर्मी के प्रवाह को भी प्रतिबंधित करती हैं।
हालांकि, क्योंकि पीसीआर प्लेटें कुशल और विश्वसनीय हैं, वे नमूनों को संसाधित करते समय त्रुटियों और अशुद्धियों से ग्रस्त हैं।
तो अगर आप अच्छी क्वालिटी की पीसीआर प्लेट लेने के इच्छुक हैं। विश्वसनीय पीसीआर प्लेट निर्माता से संपर्क करना सबसे अच्छा है। इसके साथ, आप सुनिश्चित हो सकते हैं कि आपको सबसे अच्छी कीमत मिले।
अभिकर्मकों या नमूनों के संदूषण से बचने और गलत परिणामों को रोकने के लिए नीचे कुछ सावधानियां दी गई हैं।
पर्यावरण को कीटाणुरहित करें
अशुद्धियों की उपस्थिति के कारण गलत सकारात्मक या नकारात्मक परिणाम आपको परिणामों पर संदेह कर सकते हैं।
अशुद्धियाँ और संदूषक विभिन्न रूपों में आते हैं, जैसे कि असंबंधित डीएनए या रासायनिक योजक, जो अंततः प्रतिक्रिया की दक्षता और प्रभावशीलता को कम करते हैं।
पीसीआर प्लेटों की संदूषण दर को बहुत कम करने के कई तरीके हैं।
पिपेट के माध्यम से नमूने में अशुद्धियों को प्रवेश करने से रोकने के लिए निष्फल फिल्टर युक्तियों का उपयोग करना एक और उपयोगी तरीका है।
विशेष रूप से पीसीआर उपयोग के लिए पिपेट और रैक सहित उपकरणों का एक पूरी तरह से साफ सेट प्रदान किया जाता है। यह प्रयोगशाला के आसपास अशुद्धियों या संदूषकों के नगण्य हस्तांतरण की गारंटी देगा।
संदूषण को मिटाने के लिए पिपेट, रैक और बेंच पर ब्लीच, इथेनॉल का प्रयोग करें।
कण संदूषण को और कम करने के लिए सभी पीसीआर प्रतिक्रियाओं के लिए आरक्षित स्थान आवंटित करें।
हर कदम पर साफ दस्तानों का प्रयोग करें और उन्हें बार-बार बदलें।
पीसीआर प्लेट
टेम्पलेट की एकाग्रता और शुद्धता की जांच करें।
पीसीआर का उपयोग कर नमूनों का विश्लेषण करने के लिए उपयोग किए जाने वाले बेंचों और उपकरणों की साफ-सफाई बनाए रखी जानी चाहिए। विश्लेषण और प्रसंस्करण से पहले नमूनों की शुद्धता को सत्यापित करना महत्वपूर्ण है।
आमतौर पर, विश्लेषक डीएनए नमूने की एकाग्रता और शुद्धता के स्तर को ध्यान में रखता है।
260nm/280nm का अवशोषक अनुपात 1.8 से कम नहीं होना चाहिए। 230nm और 320nm के बीच तरंग दैर्ध्य का उपयोग करके अशुद्धियों की पहचान की गई।
एक उदाहरण में, 230 एनएम के अवशोषण पर कैओट्रोपिक लवण और अन्य कार्बनिक यौगिकों का पता लगाया गया था। इसके साथ ही 320 एनएम पर अवशोषण पर डीएनए नमूने में टर्बिडिटी का पता लगाएं और सत्यापित करें।
पीसीआर प्लेट और उत्पादों को ओवरलोड करने से बचें
हालांकि यह एक ही समय में कई उत्पादों को चलाने के लिए वांछनीय है, यह पीसीआर प्लेटों के क्रॉस-संदूषण का कारण बन सकता है।
विभिन्न उत्पादों के साथ पीसीआर प्लेट्स को ओवरलोड करना बेकार है और इससे नमूनों की पहचान करना मुश्किल हो जाता है।
पीसीआर रिएजेंट्स के एलिकोट्स का रिकॉर्ड रखें
निरंतर फ्रीज/पिघलना चक्र और एलिकोट्स का बार-बार उपयोग पुन: क्रिस्टलीकरण के माध्यम से पीसीआर अभिकर्मकों, एंजाइमों और डीएनटीपी को नुकसान पहुंचा सकता है।
विश्लेषण के लिए नमूने तैयार करते समय हमेशा उपयोग किए जाने वाले एलिकोट्स की दर की निगरानी करने का प्रयास करें।
पसंदीदा एलआईएमएस स्टॉक और अभिकर्मकों की मात्रा और जमे हुए या पिघलने वाले नमूनों को नियंत्रित करने के लिए अधिक उपयुक्त है।
इष्टतम एनीलिंग तापमान चुनें।
गलत एनीलिंग तापमान का चयन और उपयोग करना एक और तरीका है जिससे पीसीआर परिणामों में त्रुटियां होती हैं।
कभी-कभी प्रतिक्रिया योजना के अनुसार नहीं होती है। एक सफल प्रतिक्रिया को बढ़ावा देने के लिए एनीलिंग तापमान को कम करने की जरूरत है।
हालांकि, तापमान कम करने से झूठी सकारात्मकता और प्राइमर-डिमर की संभावना बढ़ जाती है।
पीसीआर प्लेटों का उपयोग करते समय, पिघलने की अवस्था के विश्लेषण की पुष्टि करना महत्वपूर्ण है क्योंकि यह सही एनीलिंग तापमान चुनने के लिए एक अच्छा संकेतक है।
प्राइमर डिज़ाइन सॉफ़्टवेयर डिज़ाइन में सहायता करता है, सही एनीलिंग तापमान प्रदान करता है, पीसीआर प्लेटों में त्रुटियों को सीधे कम करता है।
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