सेल कल्चर माध्यम के उपयोग में आने वाली सामान्य समस्याओं का विश्लेषण

सेल कल्चर माध्यम पशु कोशिकाओं के विवो विकास वातावरण में कृत्रिम रूप से नकल करने और इन विट्रो में कोशिकाओं के अस्तित्व और प्रसार को बनाए रखने के लिए पोषक आधार है। एक पोषक तत्व। तो सेल कल्चर माध्यम के उपयोग में आने वाली आम समस्याएं क्या हैं? आइए एक विश्लेषण करते हैं।

1. सेल कल्चर माध्यम का बफर सिस्टम चयन और पीएच परिवर्तन

चूंकि अधिकांश कोशिकाओं के लिए इष्टतम पीएच 7.0 और 7.4 के बीच है, इस सीमा से विचलन का कोशिका वृद्धि पर हानिकारक प्रभाव पड़ सकता है। हालांकि, विभिन्न कोशिकाओं की पीएच आवश्यकताएं बिल्कुल समान नहीं होती हैं। प्राथमिक सुसंस्कृत कोशिकाओं में आमतौर पर पीएच उतार-चढ़ाव के लिए खराब सहनशीलता होती है, जबकि अनंत सेल लाइनों में मजबूत सहनशीलता होती है। इसलिए, प्राथमिक संस्कृति में, संस्कृति माध्यम में बफर सिस्टम अधिक महत्वपूर्ण है। सामान्य सेल कल्चर माध्यम एक संतुलित नमक प्रणाली का उपयोग करता है, लेकिन विभिन्न संस्कृति मीडिया या संस्कृति मीडिया की एक ही श्रृंखला विभिन्न संतुलित नमक प्रणालियों का उपयोग करती है। उदाहरण के लिए, 199 श्रृंखला और MEM श्रृंखला सभी में हैंक्स का सिस्टम कल्चर माध्यम और अर्ल का सिस्टम कल्चर है। आधार। कुछ मीडिया उपर्युक्त पारंपरिक संतुलित नमक प्रणाली नहीं हैं, जैसे RPMI1640 माध्यम, F12 माध्यम। एमईएम कम सीरम माध्यम की संतुलित नमक प्रणाली भी पारंपरिक संतुलित नमक प्रणाली नहीं है, और संतुलित नमक प्रणाली की बफरिंग क्षमता पारंपरिक संतुलित नमक प्रणाली की तुलना में अधिक मजबूत होती है।

कोश पालन

सेल कल्चर के दौरान पीएच ड्रॉप के कई कारण हैं। जब कोशिकाएं बहुत तेजी से बढ़ रही होती हैं, तो पीएच मान आमतौर पर तेजी से गिर जाता है, जिसे समय पर पारित करके, पारित होने के अनुपात को बढ़ाकर या सीरम की मात्रा को कम करके हल किया जा सकता है। इसके अलावा, कल्चर बॉटल कैप का ओवरटाइटिंग, NaHCO3 बफर सिस्टम की अपर्याप्त बफरिंग क्षमता, कल्चर माध्यम में गलत नमक की सघनता, बैक्टीरिया, खमीर या फंगल संदूषण भी पीएच को तेजी से गिराने का कारण बन सकता है। इस समय, आप इसे निम्न तरीकों से हल कर सकते हैं:

1) संस्कृति माध्यम में NaHCO3 एकाग्रता बढ़ाएँ या इनक्यूबेटर में CO2 एकाग्रता घटाएँ। जब NaHCO3 सामग्री 2.0 g/L और 3.7 g/L के बीच होती है, तो संबंधित CO2 सांद्रता 5 ~ 10 प्रतिशत होती है;

2) एक CO2-स्वतंत्र संस्कृति माध्यम पर स्विच करें;

3) बोतल के ढक्कन को ठीक से ढीला करें। अंतिम एकाग्रता 10-25 मिमी बनाने के लिए संस्कृति माध्यम में HEPES बफर जोड़ें;

4) CO2 कल्चर वातावरण में अर्ल के नमक पर आधारित कल्चर सॉल्यूशन का उपयोग करें, और वायुमंडलीय कल्चर वातावरण में हैंक्स के नमक द्वारा तैयार कल्चर सॉल्यूशन का उपयोग करें;

5) संदूषण का कारण होने पर संस्कृति को त्यागें या एंटीबायोटिक दवाओं के साथ स्टरलाइज़ करें।

2. कई महत्वपूर्ण योजक आमतौर पर सेल कल्चर मीडिया और समस्याओं में उपयोग किए जाते हैं जिन्हें उपयोग प्रक्रिया में ध्यान देना चाहिए

सेल कल्चर मीडिया में पीएच के एक संकेतक के रूप में फिनोल रेड का उपयोग किया जाता है। सामान्य तौर पर, माध्यम के पीएच मान को फिनोल रेड के संकेतक प्रभाव से आंका जा सकता है, लेकिन कम सीरम या सीरम-मुक्त सेल कल्चर माध्यम में फिनोल रेड की सामग्री सामान्य सेल कल्चर माध्यम से अलग होती है, और इसे नहीं देखा जा सकता है। नग्न आंखों से या पीएच मान अनुभवजन्य रूप से निर्धारित किया जाता है, और माप के लिए पीएच मीटर का उपयोग करने की सिफारिश की जाती है। फिनोल रेड का आमतौर पर सीरम युक्त सेल कल्चर मीडिया में उत्पादित जैविक उत्पादों की गुणवत्ता पर कोई महत्वपूर्ण प्रभाव नहीं पड़ता है, और इसे शुद्धिकरण तकनीकों द्वारा भी हटाया जा सकता है, लेकिन फिनोल रेड से सीरम मुक्त सेल कल्चर मीडिया में इंट्रासेल्युलर सोडियम/पोटेशियम असंतुलन हो सकता है। , कोशिका वृद्धि को प्रभावित करता है।

सेल कल्चर प्लेट

सोडियम बाइकार्बोनेट मुख्य रूप से सेल कल्चर माध्यम में बफर सिस्टम के रूप में उपयोग किया जाता है, और आसमाटिक दबाव को विनियमित करने का भी प्रभाव पड़ता है। आमतौर पर उपयोग के लिए उत्पाद निर्देशों में सोडियम बाइकार्बोनेट की अनुशंसित मात्रा एक मानक और सुरक्षित मात्रा है, जो वैज्ञानिक आधार पर व्यावहारिक अनुभव के आधार पर प्राप्त की जाती है। हालाँकि, विभिन्न सेल लाइनों (उपभेदों) के कारण, एक ही सेल विभिन्न वातावरणों (विभिन्न सेल सहिष्णुता, आदि) के लिए अनुकूल हो सकता है, और पानी की गुणवत्ता आदि में क्षेत्रीय अंतर होते हैं, जिन्हें वास्तविक उत्पादन में थोड़ा संशोधित भी किया जा सकता है। प्रक्रिया, लेकिन उन लोगों का उपयोग जिन्हें संबंधित परीक्षण (भौतिक-रासायनिक और कोशिका उत्पादन परीक्षण, आदि) करने की आवश्यकता है।

HEPES 7.2 से 7.4 की पीएच रेंज में अच्छी बफरिंग क्षमता वाला एक गैर-आयनिक बफर है, और उच्च सांद्रता पर कुछ कोशिकाओं के लिए विषाक्त हो सकता है। अतिरिक्त HEPES के योग के कारण आसमाटिक दबाव में वृद्धि को ऑफसेट करने के लिए HEPES बफर का उपयोग सोडियम कार्बोनेट (0 .34g / L) के निम्न स्तर के साथ किया जा सकता है। इसकी सुरक्षित सांद्रता सीमा 10 ~ 25mmol / L है।

सोडियम पाइरूवेट को सेल कल्चर में एक वैकल्पिक कार्बन स्रोत के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है, और हालांकि कोशिकाएं ग्लूकोज को कार्बन स्रोत के रूप में पसंद करती हैं, कोशिकाएं ग्लूकोज की अनुपस्थिति में सोडियम पाइरूवेट को भी मेटाबोलाइज कर सकती हैं।

ग्लूटामाइन समाधान में बहुत अस्थिर है। इसे 1 सप्ताह के लिए 4 डिग्री पर 50 प्रतिशत तक विघटित किया जा सकता है। उपयोग में इसे अलग से तैयार करना सबसे अच्छा है, इसे -20 डिग्री रेफ्रिजरेटर में स्टोर करें, और उपयोग करने से पहले इसे सेल कल्चर माध्यम में जोड़ें।