नए सेल संश्लेषण और सेल चयापचय जैसे जैव रासायनिक प्रतिक्रियाओं के लिए आवश्यक पदार्थों और ऊर्जा को पूरा करने के लिए सेल कल्चर माध्यम में पर्याप्त पोषक तत्व होने चाहिए। सेल कल्चर माध्यम के मुख्य घटक पानी, अमीनो एसिड, विटामिन, कार्बोहाइड्रेट, अकार्बनिक लवण और अन्य सहायक पोषक तत्व हैं। इसलिए, हमें दैनिक प्रयोगों में सेल कल्चर माध्यम की नसबंदी विधि और संबंधित सावधानियों पर ध्यान देना चाहिए।
कोश पालन
1. विभिन्न सेल कल्चर मीडिया के लिए नसबंदी के तरीके और सावधानियां
सेल संस्कृति माध्यम की नसबंदी विधियों को आटोक्लेव नसबंदी और झिल्ली निस्पंदन नसबंदी में विभाजित किया गया है। अलग-अलग कल्चर माध्यमों में उनके अलग-अलग पोषक तत्वों के कारण अलग-अलग नसबंदी के तरीके हो सकते हैं।
आटोक्लेव
कुछ मीडिया, जैसे एमईएम, ऑटोक्लेव किए जा सकते हैं, इन मीडिया में आम तौर पर एल-ग्लूटामाइन और सोडियम बाइकार्बोनेट नहीं होते हैं, और आम तौर पर मीडिया को ऑटोक्लेव किए जाने के बाद जोड़ा जाता है। इसके अलावा, एल-ग्लूटामाइन के बजाय उच्च दबाव वाले ग्लूटामेट (जैसे एल-अलनील-एल-ग्लूटामाइन) का उपयोग किया जा सकता है। नसबंदी के समय को बढ़ाए बिना 121 डिग्री, 15 पीएसआई और 15 मिनट में पोषक तत्वों के न्यूनतम नुकसान के साथ ऑटोक्लेवेबल माध्यम पूरी तरह से निष्फल है।
अधिकांश सेल कल्चर मीडिया ऑटोक्लेविंग के लिए उपयुक्त नहीं हैं। क्योंकि कल्चर माध्यम में अक्सर विटामिन, प्रोटीन, पॉलीपेप्टाइड्स, वृद्धि कारक और अन्य पदार्थ होते हैं, ये पदार्थ उच्च तापमान या विकिरण जोखिम के तहत विकृतीकरण या कार्य के नुकसान के लिए प्रवण होते हैं, इसलिए बैक्टीरिया को हटाने के लिए उपर्युक्त तरल पदार्थ ज्यादातर फ़िल्टर और निष्फल होते हैं। निस्पंदन और नसबंदी के लिए कई फिल्टर झिल्ली उपलब्ध हैं, और उनकी सामग्री ज्यादातर पीईएस, नायलॉन, पॉली कार्बोनेट, सेल्यूलोज एसीटेट, नाइट्रोसेल्यूलोज, पीटीएफई, सिरेमिक आदि हैं। झिल्ली निस्पंदन नसबंदी वर्तमान में आमतौर पर इस्तेमाल की जाने वाली और सुविधाजनक विधि है। 0.2 माइक्रोन छिद्र आकार वाली फिल्टर झिल्लियों का अक्सर उपयोग किया जाता है, और कुछ 0.1 माइक्रोन छिद्र आकार का उपयोग करते हैं। उच्च दबाव निस्पंदन की तुलना में, झिल्ली का जीवन काल होता है और अधिक महंगा होता है, लेकिन सेल संस्कृति माध्यम में पोषक तत्वों के लिए कम विनाशकारी होता है।
2. विभिन्न सेल कल्चर मीडिया के भंडारण के दौरान सावधानियां
आम तौर पर, लिक्विड सेल कल्चर मीडियम को -20 डिग्री पर नहीं जमना चाहिए, क्योंकि विगलन के दौरान पोषक तत्व अवक्षेपित हो सकते हैं, जो कल्चर प्रभाव को प्रभावित करेगा। सामान्य परिस्थितियों में, इसे प्रकाश से 2 ~ 8 डिग्री दूर संग्रहित किया जाना चाहिए। उपयोग करने से पहले, इसे रेफ्रिजरेटर से बाहर निकालें और इसे संतुलन के लिए कमरे के तापमान पर रख दें। सामान्य तरल माध्यम 6 से 12 महीनों के लिए वैध होता है। लिक्विड सेल कल्चर मीडियम के लंबे समय तक स्टोरेज से बचने की कोशिश करें। भंडारण समय के विस्तार के साथ इसमें ग्लूटामाइन धीरे-धीरे विघटित हो जाएगा। यदि सेल की वृद्धि अच्छी नहीं है, तो आप ग्लूटामाइन जोड़ने के लिए निर्धारित करने के लिए माध्यम में ग्लूटामाइन सामग्री का परीक्षण करने पर विचार कर सकते हैं। . व्यावसायिक रूप से उपलब्ध लिक्विड सेल कल्चर माध्यम की एक विशिष्ट समाप्ति तिथि होती है। तरल तैयार करने के लिए सूखे पाउडर सेल कल्चर माध्यम का उपयोग करने के बाद, इसे कम तापमान (2 ~ 8 डिग्री) पर भी संग्रहित किया जाना चाहिए। माध्यम में ग्लूटामाइन के आसान क्षरण के अलावा, माध्यम में अन्य घटकों को भी बढ़ते तापमान के साथ अवक्रमित या अवक्षेपित किया जा सकता है।