सेल कल्चर स्टेप्स एंड सावधानियां

1. रिकवरी

●1. क्रायोवियल को तरल नाइट्रोजन से बाहर निकालें, इसे तुरंत 37 डिग्री पानी के स्नान में डाल दें, और इसे थोड़ा हिलाएं। तरल के पिघलने (लगभग 1-1.5 मिनट) के बाद, इसे बाहर निकालें और कुछ अल्कोहल का छिड़काव करें और इसे अल्ट्रा-क्लीन वर्कबेंच पर रख दें।

●2. उपरोक्त सेल निलंबन को 10 मिलीलीटर माध्यम से भरे 15 मिलीलीटर अपकेंद्रित्र ट्यूब में प्रेरित करें (दीवार का पालन करने वाली सभी कोशिकाओं को धोने के लिए मध्यम के साथ क्रायोप्रेज़र्वेशन ट्यूब धोएं), और 5 मिनट के लिए 1000 आरपीएम पर सेंट्रीफ्यूज करें।

●3. सतह पर तैरनेवाला बंद डालो और कोशिकाओं को निलंबित करने के लिए माध्यम का 1 मिलीलीटर जोड़ें। संस्कृति के माध्यम के 10 मिलीलीटर युक्त 10 सेमी पेट्री डिश में एस्पिरेटेड और पेट्री डिश में कोशिकाओं को समान रूप से वितरित करने के लिए धीरे-धीरे आगे और पीछे हिलाया।

●4. सेल प्रकार और दिनांक, कल्टीवेटर का नाम आदि को लेबल करें और इसे खेती के लिए CO2 इनक्यूबेटर में रखें। कोशिकाओं को दीवार का पालन करने के बाद, माध्यम को बदलें।

●5। हर 3 दिन में मीडियम बदलें।

2. पासिंग

●1. पैसेज जब कल्चर डिश में सेल कवरेज 80 प्रतिशत -90 प्रतिशत तक पहुंच जाता है।

●2. मूल माध्यम महाप्राण ।

●3. उपयुक्त ट्रिप्सिन (कोशिकाओं को ढकने के लिए पर्याप्त) जोड़ें और 1-2 मिनट के लिए डाइजेस्ट करें।

●4. कोशिकाओं को गोल करने के बाद, पाचन को समाप्त करने के लिए सीरम युक्त माध्यम की समान मात्रा जोड़ें।

●5। पिपेट द्वारा कोशिकाओं को निलंबित करने के लिए पिपेट का उपयोग करें।

●6। 5 मिनट के लिए 1000 आरपीएम पर 15 मिलीलीटर सेंट्रीफ्यूज ट्यूब और सेंट्रीफ्यूज में कोशिकाओं को एस्पिरेट करें।

●7। सतह पर तैरनेवाला डालो, {{1}मिली माध्यम जोड़ें, और कोशिकाओं को उड़ा दें।

●8। कक्ष प्रकार के आधार पर कक्षों को कई व्यंजनों में स्थानांतरित करें । आम तौर पर, 5 कैंसर कोशिकाएं और 3 सामान्य कोशिकाएं होती हैं। खेती करना जारी रखें।

3. क्रायोप्रिजर्वेशन डाइजेस्ट द सेल्स एंड सेंट्रीफ्यूज (ibid.)। तैयार फ्रीजिंग समाधान के साथ कोशिकाओं को निलंबित करें, और उन्हें निष्फल क्रायोविअल्स में वितरित करें, उन्हें कुछ मिनटों के लिए खड़े रहने दें, और सेल प्रकार और क्रायोप्रिजर्वेशन तिथि का संकेत दें। 30 मिनट के लिए 4 डिग्री, 30 मिनट के लिए -20 डिग्री, रात भर के लिए -80 डिग्री, और फिर भंडारण के लिए तरल नाइट्रोजन में रखा गया। क्रायोप्रिजर्वेशन समाधान तैयार करना: 70 प्रतिशत पूर्ण माध्यम प्लस 20 प्रतिशत एफबीएस प्लस 10 प्रतिशत डीएमएसओ। डीएमएसओ को धीरे-धीरे ड्रॉपवाइज जोड़ा जाना चाहिए, टपकते समय मिलाते हुए।