आज, पीसीआर प्रयोगों में एक प्रमुख तत्व - उपभोग्य सामग्रियों के बारे में बात करते हैं। पीसीआर के लगातार आगंतुक के रूप में, पीसीआर उपभोग्य सामग्रियों से संबंधित विशेषताओं और शब्दावली को समझना आवश्यक है।
बाजार पर पीसीआर उपभोग्य सामग्रियों की एक विस्तृत विविधता है, जिसमें ब्रांड, विनिर्देश, रंग आदि शामिल हैं, जो चमकदार हैं। आइए इसे स्टेप बाय स्टेप समझते हैं।
पीसीआर प्लेट
1. सामग्री
आमतौर पर, पीसीआर उपभोग्य सामग्रियों का कच्चा माल पॉलीप्रोपाइलीन होता है। यह एक अच्छी गर्मी प्रतिरोधी निष्क्रिय सामग्री है। काम करने की तापमान सीमा -30 से 140 डिग्री है, जो इसे पीसीआर प्रतिक्रिया के थर्मल चक्र के दौरान थर्मल ऊर्जा परिवर्तनों का सामना करने में सक्षम बनाती है, और पीसीआर प्रतिक्रिया प्रणाली में पदार्थों को सील करने और उनकी सुरक्षा करने में अच्छी भूमिका निभाती है।
पॉलीप्रोपाइलीन के बारे में और जानें
2. रंग
आम सफेद ट्यूब और पारदर्शी पीसीआर ट्यूब हैं। पारंपरिक पीसीआर प्रयोगों में दोनों के बीच कोई अंतर नहीं है। हालांकि, एक ही वास्तविक समय/qPCR प्रयोग में, सफेद ट्यूब अपेक्षाकृत अधिक संवेदनशील थे और एपिकल सिग्नल रीड्स के साथ qPCR उपकरणों के लिए संगत थे (नीचे आंकड़े ए और बी देखें)। ऐसा क्यों है?
पीसीआर ट्यूब
ए: स्पष्ट ट्यूबों की तुलना में सफेद ट्यूबों के लिए कम सीटी मान; बी: सफेद ट्यूबों के साथ बेहतर दोहराव।
क्यूपीसीआर का मुख्य डेटा सीटी वैल्यू है, और फ्लोरेसेंस सिग्नल सीटी वैल्यू की गणना के लिए डेटा स्रोत है, इसलिए यह बहुत महत्वपूर्ण है कि क्या ट्यूब में फ्लोरेसेंस पूरी तरह से डिटेक्टर को प्रेषित किया जा सकता है। सफेद ट्यूब की दीवार प्रतिदीप्ति को ट्यूब की दीवार से गुजरने और अपवर्तक (नीचे चित्र A) से रोकती है, जिससे प्रतिदीप्ति को हीटिंग ब्लॉक (यानी, धातु के छेद की दीवार जहां ट्यूब रखा जाता है) में प्रेषित होने से रोका जाता है और अवशोषित किया जाता है। या असंगत रूप से ब्लॉक द्वारा परिलक्षित होता है। स्पष्ट ट्यूब (नीचे चित्रा बी) की तुलना में सफेद ट्यूब की नोक पर एक मजबूत और अधिक केंद्रित फ्लोरोसेंट सिग्नल एकत्र किया गया था।
पीसीआर ट्यूब
ए: पारदर्शी ट्यूब और सफेद ट्यूब में प्रतिदीप्ति संकेत की बदलती प्रवृत्ति; बी: फ्लोरेसिन की समान मात्रा जोड़ने के बाद फ्लोरेसेंस तीव्रता की तुलना।
इसलिए यदि आप शीर्ष-पठन qPCR उपकरण का उपयोग कर रहे हैं, तो सफेद ट्यूबों का प्रयास करें।
3. गुणवत्ता (दुबला या दुबला नहीं)
उपभोज्य गुणवत्ता के महत्व पर यहाँ जोर दिया गया है। qPCR उपभोग्य सामग्रियों को संदूषकों और अवरोधकों से मुक्त होना चाहिए। उच्च दबाव और विकिरण बैक्टीरिया और DNases को हटाते हैं, लेकिन धूल और डीएनए अवशेषों को नहीं, जो PCR प्रतिक्रियाओं को बाधित कर सकते हैं या निरर्थक प्रवर्धन उत्पन्न कर सकते हैं। पदार्थों में अवशोषण होता है, और यहां तक कि छोटे प्रदूषक भी प्रतिक्रिया प्रणाली में प्रतिदीप्ति को अवशोषित करेंगे और प्रतिदीप्ति संकेतों के संग्रह को प्रभावित करेंगे। प्रयोग पर अशुद्धता संदूषण के प्रभाव को प्रदर्शित करने के लिए प्रयोग के एक अतिरंजित संस्करण का उपयोग किया गया था। जैसा कि नीचे दिए गए चित्र में दिखाया गया है, एक अशुद्धता सप्तक के प्रतिक्रिया कुओं में से एक में रखी गई थी। जैसा कि अपेक्षित था, प्रवर्धन वक्रों ने चिह्नित विसंगतियों को दिखाया।
पीसीआर प्रतिक्रिया ट्यूबों में अशुद्धता
↑ प्रतिक्रिया नली में अशुद्धियाँ
8 पट्टी
↑ 8 नलियों के लिए बार-बार प्रतिक्रिया परिणाम, बाएं कुएं की अशुद्धता वक्र को "विचलित" करती है।
अनुस्मारक: सावधान रहें कि उपभोग्य सामग्रियों को लंबे समय तक हवा में न रखें। उपभोग्य सामग्रियों को बाहर निकालने के बाद, पैकेजिंग बैग को नंगे हाथों से छूने से बचने के लिए जल्दी से सील करना सुनिश्चित करें। हो सके तो साफ बेंच पर बैठकर काम करें।
4. क्षमता / आकार / प्रवाह
वॉल्यूम निर्धारित करता है कि कितना नमूना (प्रतिक्रिया वॉल्यूम) लोड किया जा सकता है। ओवरडोजिंग के परिणामस्वरूप गर्मी हस्तांतरण दक्षता, छलकाव या क्रॉस-संदूषण कम हो सकता है; अंडरडोजिंग के परिणामस्वरूप बाष्पीकरणीय नमूना हानि हो सकती है। क्यूपीसीआर उपकरण का हीटिंग ब्लॉक लागू उपभोग्य सामग्रियों और लागू प्रतिक्रिया प्रणाली के आकार को भी निर्धारित करेगा। थ्रूपुट को समझना आसान है, यह एक प्रयोग में लोड किए जा सकने वाले नमूनों की अधिकतम संख्या है। सामान्य क्षमता और प्रवाह विनिर्देश नीचे दी गई तालिका में दिखाए गए हैं:
एकल ट्यूब/आठ पंक्तियां {{0}}.2mL, 0.1mL
{{0}}वेल प्लेट 0.2mL, 0.1mL
{{0}}वेल प्लेट 0.2mL
क्षमता विनिर्देशों को भी आम तौर पर मानक और निम्न प्रकारों में विभाजित किया जाता है, जैसा कि नीचे दिखाया गया है। लो प्रोफाइल उपभोग्य सामग्रियों की ऊंचाई कम होती है। यह छोटा डिज़ाइन प्रतिक्रिया प्रणाली के ऊपर की जगह को कम करता है ("मृत मात्रा" - बेकार हिस्सा), थर्मल साइकलिंग के दौरान वाष्पीकरण के प्रभाव को कम करता है, और गर्मी हस्तांतरण दक्षता में सुधार के लिए हीटिंग मॉड्यूल को इसके चारों ओर लपेटने में सक्षम बनाता है। इसलिए, लो प्रोफाइल ट्यूब को "फास्ट" ट्यूब या प्लेट के रूप में भी जाना जाता है।
पीसीआर ट्यूब
अनुस्मारक: आमतौर पर इस्तेमाल की जाने वाली प्रतिक्रिया मात्रा 2 0 μL है, और 0.1 एमएल या छोटी मात्रा की एक छोटी मात्रा प्रतिक्रिया ट्यूब का उपयोग करने की सिफारिश की जाती है।
5. दीवार की मोटाई
ट्यूब की दीवार की मोटाई सीधे तापीय चालकता को प्रभावित करती है। लगातार गर्मी हस्तांतरण प्रदान करने के लिए पीसीआर उपभोग्य सामग्रियों की दीवार की मोटाई समान होनी चाहिए। अति पतली ट्यूब दीवार मानक संस्करण की तुलना में 50 प्रतिशत पतली है, जो थर्मल बाधा को और कम करती है और तेज और बेहतर प्रतिक्रिया प्रभाव लाती है। इसलिए, पीसीआर प्रतिक्रियाओं की दक्षता को अधिकतम करने और स्थिर और कुशल प्रतिक्रियाओं को सुनिश्चित करने के लिए, वर्दी और अति पतली पीसीआर उपभोग्य वस्तुएं सबसे अच्छी पसंद हैं।
6. पारदर्शिता
क्यूपीसीआर के लिए कैप्स और सीलिंग फिल्मों को विकृति को कम करते हुए (टॉप-रीड क्यूपीसीआर इंस्ट्रूमेंट्स के लिए) इष्टतम पैठ और फ्लोरोसेंट संकेतों के संचरण को सुनिश्चित करने के लिए उच्च ऑप्टिकल स्पष्टता की आवश्यकता होती है। ट्यूब दीवार की पारदर्शिता जितनी अधिक होगी, यह प्रायोगिक परिणामों को प्रभावित कर सकती है। कारण ऊपर बताया गया है। पारंपरिक पीसीआर इस सुविधा को अनदेखा कर सकता है।
7. स्कर्ट
पीसीआर प्लेट की स्कर्ट प्लेट के परिधीय विस्तार को संदर्भित करती है। प्रतिक्रिया प्रणाली का निर्माण करते समय, स्कर्ट पिपेटिंग प्रक्रियाओं के लिए एक स्थिर समर्थन के रूप में कार्य करता है और स्वचालित कार्यस्थानों के साथ संयुक्त होने पर यांत्रिक शक्ति और पकड़ प्रदान करता है। तीन सामान्य प्रकार की स्कर्ट, हाफ स्कर्ट और फुल स्कर्ट (नीचे की आकृति में ए, बी और सी के अनुरूप) हैं।
स्कर्ट रहित: अधिकांश PCR या qPCR उपकरणों के साथ उपयोग किया जा सकता है, लेकिन स्वचालित अनुप्रयोगों के लिए नहीं। पिपेटिंग के दौरान स्थानांतरित करना आसान है, बहुत स्थिर नहीं है, प्लेट धारक के साथ उपयोग करने की आवश्यकता है।
आधा स्कर्ट: अच्छी पाइपिंग स्थिरता के साथ स्वचालित अनुप्रयोगों के लिए आदर्श।
पूर्ण स्कर्ट प्लेट: स्वचालित अनुप्रयोगों के लिए आदर्श। अच्छी यांत्रिक शक्ति, उभरे हुए मॉड्यूल के साथ पीसीआर उपकरणों के लिए उपयुक्त, पाइपिंग के दौरान उच्च स्थिरता।
पीसीआर प्लेट
टिप्स: स्कर्ट का महत्व औद्योगीकरण और स्वचालित बैच प्रसंस्करण को सुविधाजनक बनाने के लिए अधिक है, जो रोबोटिक आर्म के साथ संयुक्त है। पारंपरिक अनुसंधान प्रयोगशालाओं में इसकी आवश्यकता नहीं हो सकती है, कोई स्कर्ट पर्याप्त नहीं है।
पीसीआर प्लेट
8. पैराफिल्म
पीसीआर प्लेट सीलिंग फिल्म स्पष्ट प्लास्टिक या एल्यूमीनियम पन्नी से बनी होती है। चिपकने वाली पारदर्शी फिल्में अधिक सामान्य हैं, 96 या 384 अच्छी तरह से प्लेटों के लिए उपयुक्त हैं, और इसमें पर्याप्त प्रकाश संप्रेषण होना चाहिए। फिल्म को सील करते समय, हवा के रिसाव से बचने के लिए सीलिंग छेद के चारों ओर फिल्म को दबाने के लिए एक छोटा कार्ड इस्तेमाल किया जाएगा।
चिपकने वाली एल्यूमीनियम फिल्में कम आम हो सकती हैं। हालांकि qPCR के लिए उपयुक्त नहीं है, यह प्रकाश के प्रति संवेदनशील नमूनों के लिए आदर्श उपभोज्य है। क्योंकि इसे पंच किया जा सकता है, यह पीसीआर (पारंपरिक पीसीआर के लिए) में सैंपल ट्रांसफर की सुविधा देता है।
पीसीआर प्लेट सीलिंग फिल्म
संक्षेप
पीसीआर प्रणाली के वाहक के रूप में, प्रायोगिक डेटा की गुणवत्ता में सुधार के लिए उपभोग्य वस्तुएं बहुत महत्वपूर्ण हैं। मुझे आशा है कि यह साझाकरण आपको पीसीआर उपभोग्य सामग्रियों पर कुछ युक्तियों को समझने में मदद कर सकता है और उपभोग्य सामग्रियों के बेहतर चयन के लिए सहायता प्रदान कर सकता है।