महामारी के बाद के युग में, "न्यूक्लिक एसिड परीक्षण" शब्द हम सभी से परिचित है, और यह हमारे दैनिक जीवन का एक हिस्सा बन गया है।
तो, क्या आप जानते हैं कि न्यूक्लिक एसिड परीक्षण वायरस का पता कैसे लगाता है? और न्यूक्लिक एसिड परीक्षण कैसे अदृश्य वायरस को "दृश्यमान" बनाता है?
01 न्यूक्लिक अम्ल क्या है
न्यूक्लिक एसिड डीएनए और आरएनए के लिए सामान्य शब्द है।
न्यूक्लिक एसिड पृथ्वी पर सभी ज्ञात जीवन का एक अनिवार्य घटक है। डीएनए को हम अक्सर डीऑक्सीराइबोन्यूक्लिक एसिड कहते हैं। नए कोरोनावायरस की आनुवंशिक सामग्री आरएनए - राइबोन्यूक्लिक एसिड है।
न्यूक्लिक एसिड प्रवर्धन परीक्षण
02 न्यूक्लिक अम्ल परीक्षण वास्तव में क्या पता लगाता है?
न्यूक्लिक एसिड का पता लगाने वाला पदार्थ वायरस का न्यूक्लिक एसिड है।
नया कोरोनावायरस एक वायरस है जिसमें केवल आरएनए होता है, और वायरस में विशिष्ट आरएनए अनुक्रम एक मार्कर है जो वायरस को अन्य रोगजनकों से अलग करता है। न्यूक्लिक एसिड डिटेक्शन यह पता लगाने के लिए है कि रोगी के श्वसन नमूने या रक्त में विदेशी आक्रमणकारी वायरस का न्यूक्लिक एसिड है या नहीं, यह निर्धारित करने के लिए कि क्या वह नए कोरोनोवायरस से संक्रमित है। नए कोरोनोवायरस के वर्तमान न्यूक्लिक एसिड का अधिकांश हिस्सा रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन के बाद पीसीआर द्वारा वायरल आरएनए के लक्ष्य अनुक्रम को बढ़ाने के लिए फ्लोरोसेंट क्वांटिटेटिव पीसीआर विधि का उपयोग करता है।
पीसीआर, या पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन, एक आणविक जीव विज्ञान तकनीक है जिसका उपयोग विशिष्ट डीएनए अंशों को बढ़ाने के लिए किया जाता है; यह विशिष्ट जीनों के डीएनए पोलीमरेज़-उत्प्रेरित प्रतिक्रिया को संदर्भित करता है या डीएनए अनुक्रमों के इन विट्रो प्रवर्धन में तेजी से प्रतिक्रिया को इन विट्रो प्रवर्धन में जीन भी कहा जाता है। फ्लोरोसेंट क्वांटिटेटिव पीसीआर तकनीक पीसीआर रिएक्शन सिस्टम में एक फ्लोरोसेंट रिपोर्टर सिस्टम जोड़ना है, और वास्तविक समय में पीसीआर प्रक्रिया की निगरानी के लिए फ्लोरोसेंट सिग्नल के परिवर्तन का उपयोग करना है, ताकि प्रारंभिक टेम्पलेट की मात्रात्मक पहचान का एहसास हो सके।
न्यूक्लिक एसिड का पता लगाने के लिए पहला कदम एक नमूना एकत्र करना है। वर्तमान में, सबसे पारंपरिक नमूना विधि है: ऊपरी श्वसन पथ (ग्रसनी या नाक गुहा) को पोंछने और इकट्ठा करने के लिए गले के फाहे या नाक के फाहे का उपयोग करें; एकत्र किए गए नमूनों को सख्ती से सील किया जाएगा और फिर धीरे-धीरे परीक्षण के लिए प्रयोगशाला भेजा जाएगा।
1. वायरल आरएनए का निष्कर्षण
सबसे पहले सैंपल से वायरस का आरएनए निकाला जाता है। वायरस को नष्ट करने और न्यूक्लिक एसिड को छोड़ने के लिए नमूने में न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण अभिकर्मकों को जोड़ें।
2. सीडीएनए में वायरल आरएनए का "रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन"
रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन टेक्नोलॉजी (आरटी) के माध्यम से, वायरस के आरएनए को एक विशिष्ट डीएनए में "उलटा" किया जाता है जो कि सीडीएनए का पता लगाने के लिए अधिक सुविधाजनक है।
3. सीडीएनए का प्रवर्धन और पता लगाना
वास्तव में, चाहे वह थ्रोट स्वैब हो, नेज़ल स्वैब हो या ब्लड सैंपलिंग, सैंपल में वायरस की मात्रा अपेक्षाकृत कम होती है, यहां तक कि गंभीर रूप से संक्रमित रोगियों में भी (वायरल लोड बड़ा होता है); क्योंकि वायरस के कण बहुत छोटे हैं और सैंपलिंग की मात्रा सीमित है, न्यूक्लिक एसिड का पता लगाने के लिए सैंपल में मौजूद वायरस की संख्या अभी भी बहुत कम है।
इसलिए, पीसीआर तकनीक का उपयोग करके, निरीक्षक नमूने में नए कोरोनोवायरस के अद्वितीय "पासवर्ड" को उस बिंदु तक बढ़ाते हैं जहां उपकरण इसका पता लगा सकते हैं, ताकि यह तय किया जा सके कि यह एक सकारात्मक संक्रमण है या नहीं। वायरस के जेनेटिक मटेरियल को हड़पने की पूरी प्रक्रिया मछली पकड़ने जैसी है। हुक उसे पहचान लेगा और पकड़ लेगा, ताकि वायरस के पास छिपने के लिए कोई जगह न हो।
सीधे शब्दों में कहें, यह सीडीएनए की संख्या को बढ़ाना है, ताकि सीडीएनए की लगातार प्रतिकृति हो, ताकि संख्या तेजी से बढ़े।
मानक पीसीआर प्रक्रिया को तीन चरणों में बांटा गया है:
विकृतीकरण: डीएनए के दोहरे रेशों को अलग करने के लिए उच्च तापमान का उपयोग। डीएनए डबल स्ट्रैंड के बीच हाइड्रोजन बांड उच्च तापमान (93 - 98 डिग्री) पर टूट जाते हैं।
एनीलिंग: डीएनए डबल स्ट्रैंड्स के अलग होने के बाद, तापमान को कम किया जाता है ताकि प्राइमर्स सिंगल फंसे हुए डीएनए से जुड़ सकें।
विस्तार: डीएनए पोलीमरेज़ तापमान कम होने पर प्राइमर बाध्य से डीएनए स्ट्रैंड के साथ एक पूरक स्ट्रैंड को संश्लेषित करता है। जब बढ़ाव पूरा हो जाता है, तो एक चक्र पूरा हो जाता है और डीएनए के टुकड़ों की संख्या दोगुनी हो जाती है। इन तीन चरणों को 25-35 बार दोहराएं, और डीएनए अंशों की संख्या तेजी से बढ़ेगी।
पीसीआर डबल-फंसे टेम्पलेट
जबकि सीडीएनए को बढ़ाया जा रहा है, किट में फ्लोरोसेंट जांच एक साथ काम कर रही है। यह एक फ्लोरोसेंट सिग्नल जारी करेगा, और हर बार जब सीडीएनए प्रवर्धित होता है, तो फ्लोरोसेंट सिग्नल थोड़ा बढ़ जाएगा, और पीसीआर डिटेक्टर एक फ्लोरोसेंट सिग्नल वृद्धि का सीटी मान रिकॉर्ड कर सकता है।
वायरस के न्यूक्लिक एसिड के नकारात्मक या सकारात्मक होने का पता लगाने के लिए सीटी मान एक महत्वपूर्ण संकेतक है। कम प्रारंभिक डीएनए, एक निश्चित सीमा तक पहुंचने के लिए अधिक पीसीआर चक्रों की आवश्यकता होती है, और सीटी मान जितना अधिक होता है। इसके विपरीत, प्रारंभिक डीएनए जितना अधिक होगा, सीटी मान उतना ही कम होगा। डीएनए की प्रारंभिक मात्रा नमूने में वायरल आरएनए की मात्रा को दर्शाती है, जो बदले में नमूने में वायरस की मात्रा को दर्शाती है। इसलिए, यदि सीटी मान का पता नहीं चलता है या एक निश्चित मूल्य से अधिक है, तो संदिग्ध रोगी को नकारात्मक माना जाता है; यदि यह इस मान से कम है, तो संदिग्ध रोगी को सकारात्मक माना जाता है।
पीसीआर प्रतिक्रिया के दौरान, पीसीआर उपभोग्य सामग्रियों का चयन भी न्यूक्लिक एसिड का पता लगाने के परिणामों को प्रभावित करने वाले सबसे महत्वपूर्ण कारकों में से एक है।
